【摘要】目的探讨天芪降糖胶囊对糖尿病肾病（DKD）大鼠模型肾功能的影响及其机制。方法将60只体重为180~200 g 8周龄雄性SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、DKD模型组、厄贝沙坦组以及天芪降糖胶囊低、中和高剂量组共6组，每组10只，采用链脲佐菌素（35 mg/kg）单次腹腔注射法造成DKD大鼠模型，成模后以厄贝沙坦[20 mg/（kg·d）]或天芪降糖胶囊水溶液[0.32、0.64、1.28 g/（kg·d）]灌胃。12周后称体重，测血糖、血脂，收集大鼠24 h尿液，测尿微量白蛋白值，收集血清检测转化生长因子β1（TGF-β1）含量。一侧肾脏做病理形态学检查，另一侧肾脏匀浆后测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，以方差分析（ANOVA）、最小显著性差异法（LSD法）或多重比较校正法（Bonferroni法）进行统计学分析。结果12周后，天芪降糖胶囊高剂量组空腹血糖（[23.8±3.5）比（29.4±3.3）mmol/L]、总胆固醇（[1.67±0.32）比（2.40±0.19）mmol/L]、甘油三酯（[1.62±0.25）比（2.76±0.64）mmol/L]、24 h尿微量白蛋白含量（[1 411±156）比（2 018±259）μg/24 h]、血清TGF-β1含量（[333±46）比（650±64）μg/ml]均低于模型组，肾组织SOD[（402±22）比（223±32）U/ml]、GSH-Px活性（[1 633±37）比（1 181±53）U/ml]均高于模型组（均P<0.05），与厄贝沙坦组相近甚至更优。肾脏组织学观察显示，与模型组相比，天芪降糖胶囊高剂量组肾小球形态正常，基底膜无增厚，系膜细胞数量无增多，系膜区基质明显减少，肾小管上皮细胞水肿减轻。结论高剂量天芪降糖胶囊可降低DKD大鼠血糖、血脂、蛋白尿，改善肾脏纤维化，延缓DKD的发展进程。其作用机制可能与增强肾脏抗氧化应激和抗纤维化功能有关。

糖尿病肾病（diabetic kidney disease，DKD）是导致终末期肾病最常见的原因，也是糖尿病患者的主要死亡原因之一。中医药治疗DKD具有一定的优势，不少临床试验表明，中药在改善症状、降低尿微量白蛋白及延缓肾功能损害方面疗效优良[1-3]。天芪降糖胶囊（以下简称天芪）由黄芪、天花粉、人参、石斛、女贞子、黄连、墨旱莲、山茱萸、地骨皮、五倍子十味中药组成，具有益气养阴、清热生津之功效，主要用于气阴两虚型2型糖尿病及其并发症的治疗[4-5]。Lian等[6]通过随机、双盲、多中心临床试验，发现天芪可降低糖耐量受损患者发展为糖尿病的发生率，延缓糖尿病的进展。因此，中华医学会糖尿病学分会（CDS）在《中国2型糖尿病防治指南》（2013年版）中指出，天芪可降低糖尿病前期人群发生糖尿病的风险[7]。然而，天芪对于糖尿病慢性并发症尤其是DKD等是否有预防和治疗作用，目前尚无系统研究。本实验旨在探索天芪对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及可能的机制。

材料与方法

一、实验动物及材料

健康清洁级雄性SD大鼠60只，体重为180~200 g，血糖正常，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号SCXK（沪）2012-0002，饲养于江苏省中医药研究院动物实验中心（无特定病原体级）。天芪由黑龙江未名天人制药有限公司提供，厄贝沙坦片（安博维）由杭州赛诺菲民生制药有限公司提供。检测血糖所用试纸购自江苏鱼跃医疗设备股份有限公司。链脲佐菌素为美国Sigma公司产品，柠檬酸和柠檬酸三钠为天津化学试剂有限公司产品，大鼠24 h尿白蛋白试剂盒与超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、转化生长因子β1（TGF-β1）试剂盒均购自南京建成科技有限公司。

二、干预及检测方法

1.实验动物造模：雄性SD大鼠60只，适应性饲养1周，高脂高糖饲料喂养1个月，采用随机数字表法将所有大鼠分为空白对照组、模型组、厄贝沙坦组与天芪低、中、高剂量组共6组，每组10只。空白对照组予腹腔注射等体积0.1 mmol/L柠檬酸盐缓冲液，其他5组均用1%链脲佐菌素，按35 mg/kg的剂量单次腹腔注射，72 h后监测血糖、尿糖。如血糖值稳定，不低于16.7 mmol/L，提示糖尿病大鼠造模成功。此后，每2周监测一次大鼠24 h尿白蛋白，2个月后各实验组大鼠24 h尿白蛋白与空白对照组相比显著升高，提示DKD大鼠造模成功。

2.实验动物干预：DKD成模后，空白对照组、模型组大鼠灌服磷酸盐缓冲液；厄贝沙坦组将厄贝沙坦片溶解于磷酸盐缓冲液中灌服，20 mg/(kg·d)；天芪组将天芪原料药溶于磷酸盐缓冲液，配制成水溶研磨混悬液，低、中、高剂量组分别为0.32、0.64、1.28 g/(kg·d)。以上给药1次/d，共持续12周。

3.观察指标及方法：（1）一般指标的检测：用鱼跃血糖分析仪检测空腹血糖；用电子天平称量大鼠体重，代谢笼测24 h尿量，运用酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒检测24 h尿白蛋白定量。（2）肾组织SOD、GSH-Px检测：大鼠处死后，立即正中切口打开腹腔，于腹膜后钝性分离双侧肾脏及包膜，称取0.5 g皮质制备呈匀浆，ELISA试剂盒进行SOD、GSH-PX活性检测。（3）血清TGF-β1测定：实验结束时，从颈动脉处采血，分离血清，运用ELISA试剂盒测定血清TGF-β1。（4）肾脏皮质的病理学检查：将肾脏皮质标本以石蜡凝固后，切片进行HE染色，光镜下观察肾脏基本病理改变。

三、统计学处理

用Graphpad prism 5.0、SPSS 23.0统计学软件进行统计学分析。实验中多时间点观察所得数据采用双因素ANOVA分析（时间作为重复性因素），其余的单时间点观察所得的数据采用单因素ANOVA或成组t检验分析结果，使用单因素和双因素ANOVA后，根据方差齐性检验结果，若方差齐，则选取最小显著性差异法（least significant difference，LSD法）或多重比较校正法（Bonferroni法），若方差不齐，则用Dunnett's T3方法比较。必要时显著性检验可辅以Newman-Keuls检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

结果：

一、各组大鼠一般情况比较空白对照组大鼠一般情况良好，毛色光滑，状态活跃，行动敏捷，无明显多饮、多食、多尿症状；模型组大鼠状态较差，毛色晦暗，行动迟缓，有明显的多饮、多食、多尿症状；厄贝沙坦组、天芪高剂量组大鼠一般状态较好，多饮、多食、多尿症状和模型组相比明显改善，天芪低、中剂量组大鼠有一定程度的多饮、多食、多尿症状。二、12周后各组大鼠体重、24 h尿量和生化指标的比较12周干预结束后，天芪各组和厄贝沙坦组大鼠体重高于模型组，但差异不具有统计学意义（均P>0.05），天芪组24 h尿量减少不明显。天芪高剂量组空腹血糖低于模型组（[23.8±3.5）比（29.4±3.3）mmol/L，P<0.05]，也低于厄贝沙坦组（[26.8±3.3）mmol/L，P<0.05]。另外，天芪高剂量组和厄贝沙坦组总胆固醇和甘油三酯水平均低于模型组，差异具有统计学意义（表1）。

二、各组大鼠24 h尿微量白蛋白的比较成模后各实验组24 h尿白蛋白均高于空白对照组（[349±88）μg]，厄贝沙坦组治疗后24 h尿白蛋白低于模型组[3个月时（1 205±343）比（2 018±259）μg，P<0.05]，天芪低、中剂量组和模型组相比在治疗1个月后随着时间的增加延缓了蛋白尿的增加，天芪高剂量组24 h尿白蛋白[3个月时（1 411±156）μg]低于模型组（P<0.05，表2）。

三、各组大鼠肾组织SOD、GSH-Px活性的比较校正了血糖、血脂水平后，与空白对照组相比，模型组SOD、GSH-Px水平明显下降（P<0.01），厄贝沙坦组SOD、GSH-Px水平升高（P<0.01）。与厄贝沙坦组相似，天芪3个组SOD水平均高于模型组（均P<0.05），而天芪中、高剂量组GSH-Px水平也高于模型组（均P<0.01，表3）。

五、各组大鼠血清TGF-β1浓度的比较校正了血糖、血脂水平后，与空白对照组相比，模型组TGF-β1浓度显著升高（P<0.01），厄贝沙坦组和天芪中、高剂量组TGF-β1的浓度降低（均P<0.01，表3）。

四、各组大鼠肾脏组织形态学改变大鼠肾脏组织HE染色结果显示，与空白对照组（图A）相比，模型组（图B）肾小球结构模糊，界限不明显，系膜细胞数目增加，系膜区基质增多，肾小球毛细血管丛闭塞呈硬化状，提示糖尿病肾病的发生。天芪低剂量组（图D）可见肾小球基底膜增厚，系膜区基质增多；天芪中剂量组（图E）中肾小球基底膜增厚不明显，系膜区基质轻度增多，和模型组相比糖尿病肾病有所减轻；而厄贝沙坦组（图C）和天芪高剂量组（图F）肾小球细胞形态基本正常，各细胞间界限明显，基底膜无增厚，毛细血管管腔无狭窄，系膜细胞数量无增加，系膜区基质成分明显减少，肾小管上皮细胞水肿减轻，起到延缓DKD进展的作用。